徐德强，肖义平，王英明，高江远，王丰，董欣然，辛竞一。 测菌管在微生物学野外实习中的应用。实验技术与管理，2010，27（10）：46-48。.pdf

Ｉ ＳＳＮ １００２ － ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． 。 ． ． ． ． ． ． ． ． 实 ４９５６ ．．．．．．．．．．． ．．．— — ＣＮ１１— —２０３ ４／ Ｔ 验 技 术 与 管 理 第 ２７卷 Ｅｘｐｅｒｉ ｍｅｎｔ ａｌＴｅｃｈｎｏｌ ｏｇｙ ａｎｄ Ｍ ａｎａｇｅｍｅｎｔ 第 １０期 Ｖ０Ｉ ＿２７ ＮＯ．１０ ２０１ ０年 １０月 Ｏｃｔ．２０１０ 测 菌管 在 微 生物 学野 外 实 习 中的应 用 徐 德 强 ，肖 义 平 ，王 英 明 ，高 江 远 ，王 （复 旦 大 学 生 命 科 学 学 院 ，上 海 摘 丰 ，董 欣 然 ，辛 竞 一 ２００４３３） 要 ：测 菌 管 是 一 种 适 用 于 水 、化 妆 品 和 涂 料 等样 品 中 的微 生 物 数 量 分 析 的 产 品 。 测 菌 管 具 有 简 便 、快 速 、 较 为 准 确 等 优 点 。在 国 内首 次 将 测 菌 管 应 用 于 学 生 的 微 生 物 学 野 外 实 习 的 教 学 ， 不但使学 生了解 和掌握 了 野 外 环 境 水 体 中 微 生 物数 量 分 析 的 较 新 方 法 ， 并 且 也 有 助 于 学 生 创 新 意 识 的 培 养 ，从 而 取 得 了 很 好 的 教 学 效果 。 关 键 词 ：测 菌 管 ；微生 物 学 ；野外 实 习 中 图分 类 号 ：Ｑ９３ ３ 文 献 标 志 码 ：Ｂ 文章 编 号 ：１００２— ４９５６（２０１０）１０—００４６—０３ Ｔｈｅａｐｐｌ ｉ ｃａｔ ｉ ｏｎｏｆＭｉ ｋｒ ｏｃｏｕｎｔＣｏｍｂｉｔ ｏｔ ｈｅｓ ｔ ｕｄｅ ｎｔ ｓ’ ｆ ｉ ｅ ｌ ｄｐｒ ａ ｃｔ ｉ ｃｅｏｆｍｉ ｃｒ ｏｂｉ ｏｌ ｏｇｙ ＸｕＤｅｑｉ ａｎｇ，Ｘｉ ａｏ Ｙｉ ｐｉ ｎｇ，Ｗ ａｎｇ Ｙｉ ｎｇｍ ｉ ｎｇ，Ｇａｏ Ｊｉ ａｎｇｙｕａｎ， Ｗ ａｎｇ Ｆｅｎｇ，Ｄｏｎｇ Ｘｉ ｎｒａｎ，Ｘｉ ｎ Ｊｉ ｎｇｙｉ （Ｃｏｌ ｌ ｅ ｇｅ ｏｆＬｉ ｆ ｅ Ｓｃ ｉ ｅ ｎｃｅｓ， Ｆｕｄａｎ Ｕ ｎｉ ｖｅｒ ｓｉ ｔｙ， Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３３， Ｃｈｉ ｎａ） Ａｂｓ ｔ ｒａｃｔ：Ｍ ｉ ｋｒ ｏｃ ｏｕｎｔＣｏｍ ｂｉｉ ｓ ａ ｐｒ ｏｄｕｃｔ ｔ ｈａｔ ｉ ｓ ａｐｐｌ ｉ ｃａｂｌ ｅｔ ｏ ｄｅｔ ｅｒ ｍｉ ｎｅ ｔ ｈｅ ｔ ｏｔ ａｌｎｕｍ ｂｅｒ ｏｆ ｍ ｉ ｃｒ ｏｏｒ ｇａｎｉ ｓ ｍｓ ｐｒｅｓｅ ｎｔｉ ｎ ｗａｔ ｅｒ， ｃｏｓｍ ｅｔ ｉ ｃｓ，ｐａｉ ｎｔ ｓ，ｅｔ ｃ． Ｉ ｔｈａｓｍ ａｎｙ ａｄｖａｎｔ ａｇｅｓｓｕｃ ｈ ａｓｓｉ ｍ ｐｌ ｅ，ｒ ａｐｉ ｄ ａｎｄ ｍ ｏｒｅ ａ ｃｃｕｒ ａｔ ｅ． Ｉ ｔｉ ｓ ｔ ｈｅ ｆ ｉ ｒ ｓｔｔ ｉ ｍｅｉ ｎ ｄｏｍ ｅｓ ｔ ｉ ｃｆ ｏｒＵＳ ｔ ｏ ａｐｐｌ ｙＭｉ ｋｒ ｏｃｏｕｎｔＣｏｍｂｉｔ ｏｓ ｔ ｕｄｅｎｔ ｓｔ ｈｅ ｆ ｉ ｅｌ ｄ ｐｒ ａｃｔ ｉ ｃ ｅ ｏｆｍ ｉ ｃ ｒｏｂｉ ｏｌ ｏｇｙ． Ｉ ｔ ｎｏｔｏｎｌ ｙ ｈｅｌ ｐｓ ｔｈｅｓｔｕｄｅｎｔｓｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ａｎｄ ｇｒａｓｐ ｔｈｅｎｅｗ ｍ ｅｔ ｈｏｄ ａｂｏｕｔｄｅｔ ｅｒ ｍｉ ｎｉ ｎｇ ｔ ｈｅｔ ｏｔ ａｌｎｕｍ ｂｅｒｏｆｍ ｉ ｃｒ ｏ— ｏｒ ｇａｎｉ ｓｍ ｓｐｒ ｅｓｅｎｔｉ ｎｆ ｉ ｅｌ ｄ ｗ ａｔ ｅｒ，ｂｕｔａｌ ｓｏ ｆ ｏｓ ｔｅ ｒｓ ｔ ｈｅｉ ｒｃ ｏｎｓ ｃｉ ｏｕｓ ｎｅｓ ｓ ｏｆｉ ｎｎｏｖａｔｉ ｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： Ｍ ｉ ｋｒ ｏｃｏｕｎｔＣｏｍ ｂｉ；ｍ ｉ ｃｒ ｏｂｉ ｏｌ ｏｇｙ；ｆ ｉ ｅｌ ｄ ｐｒ ａｃｔ ｉ ｃｅ 高校学生 的微生 物学 野外实 习是微 生物 学教学 的 一 个重 要环节 ， 教学 实 习 中引 入相 关 的实 验新 方 法 和 新技术 对于微 生物学 野外 实习教 学水平 的提 高具有 重 要意义 。测菌 管应用 于学 生在微 生物学 野外 实习 中的 １ 材料和方法 １．１ 材 料 测 菌 管 （ｒ ｎｉ ｋｒ ｏｃ ｏｕｎｔｃ ｏｍｂｉ ）德 国舒 美 有 限公 司 产 野外不 同环境 水体 中细菌 、 霉菌 和酵母 菌 的数 量分 析 ， 品； 恒 温培 养箱 。 这是对 水样 中微生物 常规分 析法 的补充 和更新 口］。此 １．２ 方 法 法特别 适用 于缺乏实 验室 条件 时进行 的野外 水体 中微 １．２．１ 测菌 管简介 生 物数量 分布 调查研 究 。我 们在 学生 的微生物 学野 外 测 菌管是 由测 菌片 和塑料 圆管组 成 。其 中测 菌 片 实习教学 中， 应 用该 技术 进 行 了不 同 区域水 体 中微 生 是 由塑料薄板 （７．７ｃ ｒ ｎ ×１．９ｃ ｍ ） 作 为 培养 基载 体 ， 物 数量分 布 的初 步调 查 ， 从 而 不但 使 学 生掌 握 了该 项 在其两 面分别 附有 适于 一般细 菌和 真菌生 长 的无 菌 固 较 新 的实验技术 ， 也 让 学 生 认 识 到 建 立 简 便 、快 速 、准 体培养 基 。图 １中左侧 为 细 菌 培养 基 ，右侧 为 真 菌培 确 的野外 不 同类 型水 体 中微 生物 数量分 析新方 法 的重 养基 。细菌 生长 培养 基 中加 有 氧 化还 原 指 示 剂 ２， ３， 要 性 和必 要性 ， 也更有 助 于学生创 新意识 的培养 。 ５一 氯 化三 苯基 四氮唑 （ＴＴＣ）， 其 接受 Ｈ 后 可形 成 非水 收 稿 日期 ： ２０ ０９—１１—１ ９ 基金项 目： 国 家 基 础 科 学 人 才 培 养 基 金 项 目 “复 旦 大 学 生 物 学 基 地 ” （ ＪＯ６３Ｏ６４ ３） 作者简介 ： 徐德 强 （１９５１ ）， 男， 上 海 市 人 ，大 学 ， 副教授 ， 研究 方 向： 环 境微 生物 学 ． Ｅ－ ｍａ ｉ ｌ ： ｄｑｘｕ＠ ｆ ｕｄａｎ．ｅ ｄｕ．ｃｎ 溶性 的红 色 ２，３，５－ 三 苯 甲脬 （ＴＦ，培 养 基 表 观 呈 黄 色 ）。真菌 培养基 中加有 孟加 拉红 等细菌 抑制剂 （培养 基表 观呈红 色）。塑料薄 板一 端有 一短柄 ， 其上 连有一 螺旋 盖子 。平时 测菌 片是 置 于 该无 菌 塑料 圆 管 中 ， 并 密封 ， 室温 下保存 。此外 ， 测菌 管产 品还 附有用 以判别 样 品中微生 物 （细菌 、 霉 菌和 酵母菌 ）污染 程度用 的 、 标 徐德强 ， 等 ：测 菌 管 在 微 生 物 学 野 外 实 习 中 的 应 用 准 的对照 图谱 （见 图 ２ 图 ４），图 中的 １ ０１、１ ０。等 数 为 细菌 数量 ， 单位 为 ｃ ｆ ｕ／ｍＩ。 图 ４ 霉 菌 标 准 图谱 １．２．２ 实验 步 骤 当进 行野 外水 体 中微 生物 数 量检 测 时 ，可 按 下述 步骤 进行 ： （１）将 本 产 品 提 供 的 标 签 贴 在 测 菌 管 盖 子 表 面 （注 明 时 间 、 地 点 ）； （２）拧 开测 菌管 的盖 子 ， 取 出测 菌 片 ； （３）速将 测 菌 片 浸 入 待 检测 的水 体 中 （培 养 摹 全 图 ｌ 测菌管 浸入 水 中 ， 维 持 ５～ １０ｓ）； （４）速 将 测 菌 片 放 回 塑 料 圆 管 中 ， 拧 紧盖 子 ； ● 、 囊纛誊 ● ● ● ‘ ● ● （５）将 测 菌 管 竖 放 在 ２７～ ３０℃ 恒 温 培 养 箱 中 ，无 恒温 培养 箱则 可将 测菌 管竖 放存 室 内 （ 春、 夏或 秋季 ）； ， ＿ ● ’ ， （６）１～２ｄ后 ， 观 察 测 菌 片 黄 色培 养 基 而上 细 菌 菌落 数 ； 绝 大 多数 细菌形 成 红色 小点 状菌 落 ， 偶 然也有 ＾ 呈无 色小 点状 菌落 ； 图 ２ 细 菌 标 图 图谱 （７）３ｄ后观 察红 色培 养 基 一 面 卜霉 菌 或 酵 母 菌 菌落 数 ； （８）将观 察结 果 与本 产 品所 附 的标准 对 照 图潜进 行 比较 ，以判 断所 检 的水体 中微 生物 污染 程度 。 ２ 实验结果 在学 生 的微 生 物 学 野 外 实 习 中 ，我 们 采 用 测 菌 管 分 别 对 天 目 山 部 分 区 域 的 溪 水 、上 海 郊 区 某 市 河 图 ３ 酵母菌标准图谱 及校 园池 水 中微 生 物 数 量 分 布 进 行 了检 测 ， 结果见 表 ｌ。 表 １ 不 同环 境 水 体 中微 生 物数 量 测 定 结 果 注 ：１ ．天 【 ］Ｌ ｌ Ｊ五 一 亭。 亭、 三里亭和一 亭边溪水是 高向低快速流动的同一溪水； ２．开 山 老殿 海 拔 高 度 与五 里亭 较 接 近 ； ３．禅 源 曩海 拔 高 度 略 低 于 ４８ 实 验 技 表 １中的结果 表 明 ，天 目山五 里 亭边 和开 山老 殿 术 与 管 理 数 量分析新 方 法 的重 要 性 和必 要 性 ， 从 而也 有 助 于学 边溪 水 中细菌数量 最少 ， 而一 里亭 、三里亭边 溪水 和禅 生 创新 意识 的培养 。 源寺边 池水 中细菌 数量 比前两者 明显增多 。其原 因很 ３．２ 测 菌管技 术的优 点 可能是 水体 中微生 物 通 常来 自于 空气 、土壤 、 动、 植物 （１）能快 速得 到结果 。常规 的水 中细菌 总数 测定 残体及 人类 活动等 ， 而海 拔较低 处空 气 中尘 埃 、 微 粒较 需将 样 品培养 ２ｄ才能取 得 结果 ， 而 本 技术 只需 １～ ２ 多， 人类 活 动也增 多 ，因而直接 或间 接地增加 了水 体被 ｄ即 可 。 有机 物或微 生物污 染 的机 会 ， 并 进 而导 致 水 体 中微 生 （ ２）可 同时检测 水体 中细菌 、 霉菌 和酵母 菌 。 物数量 增加 。天 目山水体 中 除海 拔 高度较低 的禅 源寺 （ ３）使用 方便 、操作 简 单 。不需 要 实 验 室 及 大量 边水体 中检测 到少 量霉 菌 外 ， 其 余地 区未 检 测 到霉 菌 准备 工作 和复杂 的操 作 过程 ，只需 将 测菌 片 浸 入 待检 和酵母 菌 ， 原 因很 可能 是 由于 水 体 中霉 菌 和 酵母 菌 数 水体 中维持 ５～１０Ｓ， 然 后速将 此 片置于 配套 的塑料 圆 量是太少 了 ， 以至 不 能被 本 法所 检 测 到 。上 海郊 区某 管中、 拧 紧盖子并 置于恒 温培 养箱 中或室 内 （ 春、 夏、 秋 市河 中细菌数 量达 １０ ｃｆ ｕ／ｍＬ，明显 高于 上 述天 目山 季 ）即可 。即使没 有经过 微生 物学培 训 的人 也 能胜任 。 部分 区域 溪水 等 中细菌 数 量 ，原 因是 该 河 道 两旁 均 为 （４）结 果 较 为 准 确 可 靠 。该 技 术 附 有 相 应 的细 居 民生 活 区及 商业 区 ，水体 经 常 受 到来 自人类 活 动 所 菌、 霉 菌和 酵母菌 的标准 对照 图谱 ， 学 生可 根据测 菌片 产生 的含 有机 物 的生 活污 水 等 污染 ， 此 外 该地 区海 拔 上微 生物菌 落数就 能很快 确定 该水体 中微 生物 的数量 高度 明显 低于 天 目山，空气 中尘 埃 、微粒 较 多 ， 从而导 或污 染程度 。 致 该水体 中细 菌和霉 菌等 微生物数 量也 相应 增多 。校 因此该 技术确 实是一 种 简便 、 快速、 较 为准确 的微 内燕 园池 水 中微 生 物 测 试 结 果 是 低 于 上海 郊 区某 市 生物数 量分 析方法 ， 尤 其适 用 于 学 生 的微 生 物 学野 外 河， 并与 天 目山禅源 寺边池 水相似 ， 原 因可能是 由于该 实 习及 野外 水体 中微生物 数量 的调查 研究 。 池处于校 内相对 偏僻 处 ， 周 围绿化 环境 等较好 ， 有机 物 污染也相 对较少 ， 从 而水体 中微生 物数量 也相 对少些 。 参考 文献 （ Ｒｅ ｆ ｅ ｒｅ ｎｃ ｅｓ）： ［１ ］周 德 庆 ． 微 生 物 学 实 验 教 程 ［Ｍ］．２版 ．北 京 ：高 等 教 育 出 版 ３ 结论 ３．１ 测 菌管技 术应 用实 习教学 中的意 义 我们 在 国内首次将 测 菌管技术 应用 于学 生的野 外 实 习教学 盈。］， 不仅 使学生 了解并 掌握 了较新 的微 生 物 社 ，２ ００６ ． ［ ２］何 晓 青 ， 谢响 明， 李志茹 ， 等．理 科 （生 物 学 ） 基地微生物实践教学 的 研 究 与探 索 ［Ｊ ］．中国 现 代教 育 装 备 ， ２００９（４）： １ ２３ — １２５． ［３ ３康 健 ，王海 华 ．师 范类 学 生 野 外 实 习 增 加微 生 物 学 内 容 的 探 讨 ［Ｊ ］． 微 擘 物学 通报 ， ２０００， ２７（３）： ２２８， ２２３． 数 量测定 方法 ， 更 使 学生 认 识 到在 对 野 外水 体 中微 生 物 数量分 布调查 研究 中采用 简便 、快速 、准确 的微生 物 （上 接 第 ４５页 ） 本文 提 出的热丙 三 醇水 溶 液 抗原 修 复 法 ，具有 创 新性 ， 是 免疫组化 技术进 步 ， 在研究 和检测 中极 有推 广 应用 价值 。 参 考 文 献 （Ｒｅｆ ｅｒ ｅｎｃ ｅｓ）： ［１］杨 军 ， 杨 元 华 ．临床 实 验 诊 断 中 抗 原 修复 的生 化 机 制 ［Ｊ］．中 国 医 师 杂志 ， ２００４，６（ ２）： ２８６— ２８７． ［２］ＳｈｉＳＲ， ＫｅｙＥ Ｍ ， Ｋａｌ ｒ ａＫ Ｌ．Ａｎｔ ｉ ｇｅ ｎｒ ｅｔ ｒ ｉ ｅｖａ ｌｉ ｎｆ ｏｒ ｍａ ｌ ｉ ｎ— ｆ ｉ ｘｅ ｄ， ｐａｒａｆｆｉ ｎ— － ｅｍｂｅｄｄｅｄ ｔｉ ｓｓｕｅｓ ａｎ ｅｎｈａｎｃｅｍ ｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆ ｏｒ ｉ ｍ ｍｕｎｏｈｉ ｓ— — ｔｏｃｈｅｍ ｉ ｃａｌｓｔ ａｉ ｎｉ ｎｇ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｉ ｃｒｏｗａｖｅ ｏｖｅｎ ｈｅａｔ ｉ ｎｇ ｏｆ ｔ ｉ ｓｓｕｅ ｓｅｃ ｔ ｉ ｏｎｓ［Ｊ ］．ＴｈｅＪｏｕｒ ｎａ ｌｏｆＨｉ ｓ ｔ ｏｃ ｈｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙａ ｎｄＣｙｔ ｏ ｏｅｈｅ ｍｉ ｓｔ ｒ ｙ， １９９１ （３９）：７４ｌ＿ ［３］杨 军 ．生 理盐 水 作 为 抗 原 修 复 液 的 可 行 性 ＥＪ］．临床 与 实 验 病 理学 杂志 ， ２００９，２５（ ２）： ２１７ ２１８ ． ［４］Ｄａｎｅ ｓｈｔ ａ ｌ ａｂＮ，Ｄｏｒ ｅＪＥ，Ｓｍｅ ｄａＪｓ．Ｔｒ ０ ｕｂｌ ｅ ｓ ｈ００ ｔ ｉ ｎｇｔ ｉ ｓ ｓｕｅｓｐｅ ｃ ｉ — ｆ ｉ ｃｉ ｔｙ ａｎｄ ａｎｔ ｉ ｂｏｄｙ ｓｅｌ ｅｃｔｉ ｏｎ： Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｉ ｎ ｉ ｍ ｍｕｎｏｈｉ ｓｔｏｃｈｅｍｉ ｃａｌ ｓ ｔ ｕｄｉ ｅ ｓ［ Ｊ］． Ｊｏｕｒ ｎａｌｏｆＰｈａｒ ｍａ ｃｏ ｌ ｏ ｇｉ ｃａ ｌａｎｄＴｏｘｉ ｃｏｌ ｏｇｉ ｃ ａｌＭｅ ｔ ｈｏｄｓ， ２０１０，６１（２）：１２７—１３５． ［５］魏 波 ， 郑 鸿 ．高 压 锅 和 微 波抗 原 修 复 法 的 对 比 分 析 ［Ｊ ］．实 用 医技 杂 志， ２ ００５（１ ２）： ６１１－ ６１ ２． ［６］朱 忆凌 ， 周 新 木 ．抗 原 修 复 预处 理 对 层 黏 连 蛋 白免 疫 组 织 化 学 的 影 响［ Ｊ］．现 代 中西 医 结 合 杂志 ， ２００７， １６（１ ４）：１９６２． ［７］王 伯 云 ， 李 玉 松 ，黄 高 ．病 理 学 技 术 ［Ｍ］．北 京 ：人 民卫 生 出 版 社 ， ２０００：３６７． Ｅ８］吴 计生 ， 段淑云 ， 郝建平． 免 疫 组 化 抗 原 修 复 的应 用 进 展 ［Ｊ］ ．实 用 医 技 杂志 ， ２００６， １３（２Ｏ）： ３５ ９２— ３５９３． ［９］周 航 波 ， 马恒辉， 周 晓军 ．应 用 高 温 高 压抗 原 修 复 提 高 第 一 抗 体稀 释 度 口］．临 床 与 实 验病 理 学 杂 志 ， ２００９， ２５（６）： ２７０— ２７１． ［１ ０］顾 长芳 ， 张雷 ， 汪迎． 应用压力锅和微波 炉法进行石蜡切 片抗原修 复 的 比较 【Ｊ ］．中 华 病理 学 杂 志 ， １９９６， ２５（１ ２）： ３７７— ３７８． ［１ １］高 才 ， 周 国燕 ．丙 三 醇 水 溶 液 玻 璃 结 构 松 弛 现 象 学 研 究 ［ Ｊ］．物 理 化学学报 ， ２００５， ２１（８）： ９０９— ９１４．